Uffizi Galerisi'nin koleksiyonu, yeni sanat eserleri edinme anlamında sık sık "güncellenmez", çünkü çekirdek koleksiyonu tarihi niteliktedir ve büyük ölçüde, başta Rönesans dönemi olmak üzere, yüzyıllardır müzenin mülkiyetinde olan eserlerden oluşur. Bununla birlikte müze, ziyaretçi deneyimini ve bilimsel araştırmaları yenileyen ve geliştiren çeşitli uygulamalarda bulunmaktadır.
Örneğin, Uffizi düzenli olarak belirli temaları, sanatçıları veya dönemleri araştıran geçici sergileri görevli, genellikle depolarından halka açık sergilenmeyen eserleri bir araya getirmekte veya diğer kurumlardan eserler ödünç almaktadır.
Ayrıca, başta çizimler ve baskılar olmak üzere birçok sanat eserinin ışıktan zarar görebilecek hassas yapıda olması nedeniyle Uffizi bu eserleri düzenli olarak rotasyona tabi tutarak ziyaretçilere koleksiyondan farklı parçaları farklı zamanlarda görme şansı sunuyor. Nadiren de olsa, Uffizi zaman zaman bağışlar, vasiyetler veya seçici satın almalar yoluyla, genellikle koleksiyondaki belirli boşlukları doldurmak veya mevcut eserleri tamamlamak için yeni eserler edinir.