Изначально галерея Уффици была построена не как музей, а как офис для флорентийских магистратов - отсюда и ее название, "Уффици", что в переводе с итальянского означает "офисы". По заказу Козимо I Медичи, первого великого герцога Тосканы, основной целью здания было объединение административных офисов тосканского государства под одной крышей в рамках усилий Козимо по организации и укреплению недавно созданной им великокняжеской администрации.
Помимо этого, Уффици также предназначался для размещения художественных коллекций семьи Медичи, одной из самых богатых и влиятельных семей Европы того времени. По мере роста коллекции часть Уффици постепенно использовалась для демонстрации этих работ избранной публике, что ознаменовало начало ее превращения в галерею. После того как в XVIII веке династия Медичи прекратилась, последняя наследница Медичи, Анна Мария Луиза де Медичи, завещала всю коллекцию городу Флоренции с условием, что она никогда не покинет пределы города. Эта коллекция составила основу галереи Уффици в том виде, в котором мы знаем ее сегодня, официально открытой для публики в качестве музея в 1765 году.