Galeria Uffizi a fost construită inițial nu ca muzeu, ci ca birouri pentru magistrații florentini - de aici și numele său, "Uffizi", care înseamnă "birouri" în italiană. Comandată de Cosimo I de Medici, primul Mare Duce al Toscanei, scopul principal al clădirii a fost acela de a consolida birourile administrative ale statului toscan sub un singur acoperiș, ca parte a eforturilor lui Cosimo de a organiza și consolida administrația marelui ducat nou înființat.
Pe lângă aceasta, Uffizi a fost, de asemenea, destinat să găzduiască colecțiile de artă ale familiei Medici, una dintre cele mai bogate și mai influente familii din Europa la acea vreme. Pe măsură ce colecția lor creștea, părți din Galeria Uffizi au fost folosite treptat pentru a expune aceste lucrări unui public select, marcând începutul tranziției către o galerie. După ce dinastia de Medici a luat sfârșit în secolul al XVIII-lea, ultima moștenitoare de Medici, Anna Maria Luisa de' Medici, a lăsat întreaga colecție orașului Florența cu condiția ca aceasta să nu părăsească niciodată orașul. Această colecție a constituit nucleul Galeriei Uffizi așa cum o știm astăzi, deschisă oficial publicului ca muzeu în 1765.
